技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES要完成一項(xiàng)漂亮的ELISA實(shí)驗(yàn)，不光要做足實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備，還要對(duì)其他各種輔助材料有所了解，這其中防腐劑的運(yùn)用很重要，ELISA試劑盒中常用的防腐劑有：1.疊氮鈉是HRP的抑制劑，凡是和HRP接觸的試劑，一定不能用;2.硫柳汞在ELISA試劑中可普遍使用，但因其有毒，較少使用;3.市面許多試劑盒產(chǎn)品，用抗生素做防腐劑較多，如慶大。4.如果試劑僅在實(shí)驗(yàn)室短期使用，其實(shí)并不需加防腐劑，常規(guī)試劑放4度冰箱，抗體、酶等加甘油分裝凍存即可。5.防污染可添加0.02%的疊氮鈉，或0.01%的硫...
ELISA試劑盒收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。ELISA試劑盒樣本的處理方式:1、組織提取液、肺泡灌洗液等，采集后離心分離，800-1000rmpx5min，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆?2、胃液、唾液、尿液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用，胃液、唾液一般采集時(shí)間是空腹采集，一般隔夜尿不采集;3、采集血清時(shí)，一般要加入總體積1%的抗凝劑，采集后先室...
咱們?cè)谶\(yùn)用ELISA試劑盒96孔板的試驗(yàn)測(cè)定的時(shí)分，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)"，也就是外周孔顯色較基地孔深。經(jīng)研究證真實(shí)溫育中的熱力學(xué)梯度也許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在試驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中，將板從室溫(通常在25℃擺布)置于37℃溫箱，板也升溫時(shí)，在外周孔與基地孔之間也許存在一熱力學(xué)梯度。因而運(yùn)用水浴或在將反響溶液參加至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃)，就可以很容易地掃除“邊緣效應(yīng)"，而且可進(jìn)步測(cè)定的重復(fù)性。ELISA試劑盒還有就是在試驗(yàn)中...
今天我給大家講講ELISA試劑盒常壓滅菌的操作關(guān)鍵：(1)進(jìn)鍋不擠壓：擺放待滅菌的菌種袋必須分層，每層菌種袋不行擺太擠，要留一定空地，不能彼此擠壓。不適宜將菌種袋臥疊，要分層立放，以確保蒸汽暢流和接種穴無(wú)缺。為了防止棉塞易潮濕，可在棉塞上蓋一層薄膜或油紙，但掩蓋物不行太大，否則會(huì)影響上基層蒸汽暢流;也可將4個(gè)菌種袋的棉塞并攏，棉塞向下一同塞到4個(gè)菌種袋的空地中，這樣塑料袋標(biāo)準(zhǔn)要加長(zhǎng)，但防潮作用杰出。(2)及時(shí)滅菌：隨裝隨滅。配料到滅菌間隔時(shí)間越短越好，防止雜菌自繁。大規(guī)模出產(chǎn)...
ELISA試劑盒的應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation)，有人稱(chēng)之為孵育，在試劑盒中似不恰當(dāng)。ELISA試劑盒屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有z貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的...
ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。由于ELISA方法靈敏，特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備，所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)?？梢?jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性);在此為大家解讀下ELISA試劑盒檢測(cè)受影響因素中標(biāo)本的影響。溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性。可能是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，在洗滌...
ELISA試劑盒途徑的選擇決定于抗原的生物學(xué)特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學(xué)活性抗原，通常不宜選用靜脈打針。不一樣個(gè)別對(duì)共同抗原的反應(yīng)性不一樣，而且不一樣抗原發(fā)作免疫反應(yīng)的能力也有強(qiáng)有弱，因此常常在打針抗原的一起，參與能增強(qiáng)抗原的抗原性物質(zhì)，以影響機(jī)體發(fā)作較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，這種物質(zhì)稱(chēng)為免疫佐劑。免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需求量佐劑置乳缽中研磨，均勻后再邊磨邊滴參與等容積抗原液(其中加卡介苗3～4mg/ml或不加)，加...
ELISA試劑盒因此含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附聯(lián)絡(luò)的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的效果于?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí))，以增加其吸附功能。例如，在檢查抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，ELISA試劑盒而廣泛的固相載體一般不能直接與核酸聯(lián)絡(luò)。換言之，包被就是抗原或抗體聯(lián)絡(luò)到固相載體表面的進(jìn)程。當(dāng)抗原決定簇...
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